Sada pro extrakci a zesílení GMO plodin

Zvláště vhodné pro extrakci GMO plodin a detekci transgenní PCR.

Sada pro extrakci a zesílení plodin GMO je speciálně vyvinuta pro detekci GMO plodin pomocí PCR. Unikátní lyzační pufr obsažený v části A soupravy může specificky lyžovat tkáně hlavních plodin - pšenice, kukuřice, rýže, bavlny a sóji, a uvolňovat tak související složky, jako jsou nukleové kyseliny a bílkoviny. Extrakce fenol/chloroform v kombinaci se specifickou RNázou může purifikovat vysoce čistou genomovou DNA bez nečistot, jako jsou RNA, bílkoviny a kovové ionty. Purifikovaná DNA může být použita při následné detekci PCR. Část B soupravy je dvousložkový jednoduchý reakční systém PCR obsahující 2 × GMO PCR pufr a GMO DNA polymerázu. GMO DNA Polymerase je termostabilní polymeráza modifikovaná protilátkami. 2 × GMO PCR Buffer obsahuje různé složky, jako je MgCl2, dNTP, stabilizátor reakce PCR, optimalizátor a zesilovač v koncentraci 2 × GMO. Má výhody rychlé a jednoduché obsluhy, vysoké citlivosti, silné specificity, dobré stability atd. Lze jej použít v kombinaci s částí A pro transgenní PCR detekci GMO plodin.

Kočka. Ne Velikost balení
4992905 200 rxn

 

 


Detail produktu

Experimentální příklad

FAQ

Značky produktů

Funkce

■ Široká použitelnost: Tato sada může extrahovat vysoce kvalitní genomovou DNA z pěti hlavních GMO plodin.
■ Jednoduché a rychlé: Extrakci genomové DNA GMO plodin lze dokončit do 2 hodin. Není třeba velkých chladicích odstředivek, nízké požadavky na přístroje a zařízení. Vhodné pro rychlou extrakci genomové DNA GMO plodin na všech úrovních výzkumných institucí.
■ Vysoká účinnost a specificita: Unikátní pufr protilátkově modifikované Taq polymerázy zajišťuje efektivní amplifikaci polymerázy, která je specifičtější než normální Taq polymeráza.

Aplikace

Kit může extrahovat vysoce kvalitní genomovou DNA z hlavních GMO plodin, jako je pšenice, kukuřice, rýže, bavlna a sója, a provádět transgenní PCR detekci na GMO plodinách.

Všechny produkty lze přizpůsobit pro ODM/OEM. Pro detaily,klikněte prosím na přizpůsobenou službu (ODM/OEM)


  • Předchozí:
  • Další:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Extrakce genomové DNA
    Extrakce genomové DNA byla provedena na 100 mg listů rýže, kukuřice, sóji, bavlny a pšenice. Experiment se opakoval dvakrát. Na dráhu byly naneseny 3 μl DNA z celkových 100 μl eluentů.
    Koncentrace agarózového gelu byla 2%. Elektroforéza byla prováděna při 6 V/cm po dobu 20 minut.
    D15000: Marker DNA TIANGEN D15000.
    Experimental Example Detekce PCR
    Genomická DNA rýže, kukuřice, sóji, bavlny a pšenice byla amplifikována. Experiment se opakoval dvakrát. Na jeden pruh bylo naloženo 6 μl z celkového 20 μl reakčního systému.
    Koncentrace agarózového gelu byla 2%. Elektroforéza byla prováděna při 6 V/cm po dobu 20 minut.
    D15000: Marker DNA TIANGEN D15000.
    Otázka: Žádná pásma zesílení

    Šablona A-1

    ■ Šablona obsahuje proteinové nečistoty nebo inhibitory Taq atd. —— Čistěte templát DNA, odstraňte proteinové nečistoty nebo extrahujte templátovou DNA pomocí purifikačních souprav.

    ■ Denaturace šablony není úplná —— Vhodně zvyšte denaturační teplotu a prodlužte denaturační čas.

    ■ Degradace šablony —— Připravte šablonu znovu.

    Základní nátěr A-2

    ■ Špatná kvalita primerů-Znovu syntetizujte primer.

    ■ Degradace primerů —— Alikvotujte primery s vysokou koncentrací do malého objemu pro uchování. Vyvarujte se vícenásobného zmrazení a rozmrazení nebo dlouhodobé kryokonzervované na 4 ° C.

    ■ Nesprávný design primerů (např. Nedostatečná délka primeru, dimer vytvořený mezi primery atd.) -Přepracovat primery (vyhnout se tvorbě dimeru primeru a sekundární struktury)

    A-3 Mg2+koncentrace

    ■ Mg2+ koncentrace je příliš nízká —— Správně zvyšte Mg2+ koncentrace: Optimalizujte Mg2+ koncentrace sérií reakcí od 1 mM do 3 mM s intervalem 0,5 mM pro stanovení optimálního Mg2+ koncentrace pro každý templát a primer.

    A-4 Teplota žíhání

    ■ Vysoká teplota žíhání ovlivňuje vazbu primeru a šablony. —— Snižte teplotu žíhání a optimalizujte stav s gradientem 2 ° C.

    A-5 Doba prodloužení

    ■ Krátká doba prodloužení —— Prodlužte dobu prodloužení.

    Otázka: Falešně pozitivní

    Fenomény: Negativní vzorky také ukazují pásma cílové sekvence.

    A-1 Kontaminace PCR

    ■ Křížová kontaminace cílové sekvence nebo amplifikačních produktů —— Opatrně nepipetujte vzorek obsahující cílovou sekvenci do negativního vzorku ani je nevylijte z centrifugační zkumavky. Činidla nebo zařízení by měla být autoklávována, aby se odstranily stávající nukleové kyseliny, a existence kontaminace by měla být stanovena pomocí experimentů s negativní kontrolou.

    ■ Kontaminace reagencií ——Realizujte reagencie a skladujte při nízké teplotě.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ koncentrace je příliš nízká —— Správně zvyšte Mg2+ koncentrace: Optimalizujte Mg2+ koncentrace sérií reakcí od 1 mM do 3 mM s intervalem 0,5 mM pro stanovení optimálního Mg2+ koncentrace pro každý templát a primer.

    ■ Nesprávný design primerů a cílová sekvence má homologii s necílovou sekvencí. —— Přepracovat základní nátěry.

    Otázka: Nespecifické zesílení

    Jev: Pásy amplifikace PCR jsou v rozporu s očekávanou velikostí, buď velké nebo malé, nebo se někdy vyskytují jak specifické amplifikační pásy, tak nespecifické amplifikační pásy.

    Základní nátěr A-1

    ■ Špatná specificita primeru

    —— Re-design primer.

    ■ Koncentrace primeru je příliš vysoká —— Správně zvyšte denaturační teplotu a prodlužte denaturační čas.

    A-2 Mg2+ koncentrace

    ■ Mg2+ koncentrace je příliš vysoká —— Správně snižte koncentraci Mg2+: Optimalizujte Mg2+ koncentrace sérií reakcí od 1 mM do 3 mM s intervalem 0,5 mM pro stanovení optimálního Mg2+ koncentrace pro každý templát a primer.

    A-3 Termostabilní polymeráza

    ■ Nadměrné množství enzymu —— Množství enzymu přiměřeně snižte v intervalech 0,5 U.

    A-4 Teplota žíhání

    ■ Teplota žíhání je příliš nízká —— Vhodně zvyšte teplotu žíhání nebo použijte dvoustupňovou metodu žíhání

    A-5 PCR cykly

    ■ Příliš mnoho cyklů PCR — Snižte počet cyklů PCR.

    Otázka: Nepravidelné nebo rozmazané pásy

    Základní nátěr A-1——Špatná specifičnost ——Předělejte základní nátěr, změňte polohu a délku základního nátěru, abyste zvýšili jeho specifičnost; nebo proveďte vnořenou PCR.

    A-2 DNA šablony

    ——Šablona není čistá —— Purifikujte šablonu nebo extrahujte DNA pomocí purifikačních souprav.

    A-3 Mg2+ koncentrace

    ——Mg2+ koncentrace je příliš vysoká —— Správně snižte Mg2+ koncentrace: Optimalizujte Mg2+ koncentrace sérií reakcí od 1 mM do 3 mM s intervalem 0,5 mM pro stanovení optimálního Mg2+ koncentrace pro každý templát a primer.

    A-4 dNTP

    ——Koncentrace dNTP je příliš vysoká —— Vhodně snižte koncentraci dNTP

    A-5 Teplota žíhání

    —— Příliš nízká teplota žíhání —— Vhodně zvyšte teplotu žíhání

    A-6 Cykly

    ——Příliš mnoho cyklů ——Optimalizujte počet cyklů

    Otázka: Kolik templátové DNA by mělo být přidáno do 50 μl reakčního systému PCR?
    ytry
    Otázka: Jak zesílit dlouhé fragmenty?

    Prvním krokem je výběr vhodné polymerázy. Běžná Taq polymeráza nemůže být zkontrolována kvůli nedostatku aktivity 3'-5 'exonukleázy a nesoulad výrazně sníží účinnost extenze fragmentů. Pravidelná Taq polymeráza proto nemůže účinně zesilovat cílové fragmenty větší než 5 kb. Taq polymeráza se speciální modifikací nebo jinou vysoce věrnou polymerázou by měla být zvolena tak, aby se zlepšila účinnost extenze a splnily potřeby amplifikace dlouhým fragmentem. Navíc amplifikace dlouhých fragmentů také vyžaduje odpovídající úpravu designu primerů, denaturační doby, prodlužovací doby, pH pufru atd. Obvykle mohou primery s 18-24 bp vést k lepšímu výtěžku. Aby se zabránilo poškození templátu, měla by být denaturační doba při 94 ° C snížena na 30 sekund nebo méně na cyklus a doba pro zvýšení teploty na 94 ° C před amplifikací by měla být kratší než 1 min. Účinnou amplifikaci dlouhých fragmentů lze navíc zajistit nastavením teploty extenze na přibližně 68 ° C a navržením doby prodloužení podle rychlosti 1 kb/min.

    Otázka: Jak zlepšit věrnost amplifikace PCR?

    Chybovost PCR amplifikace může být snížena použitím různých DNA polymeráz s vysokou věrností. Ze všech dosud nalezených Taq DNA polymeráz má enzym Pfu nejnižší chybovost a nejvyšší věrnost (viz přiložená tabulka). Kromě výběru enzymů mohou vědci dále snížit rychlost mutace PCR optimalizací reakčních podmínek, včetně optimalizace složení pufru, koncentrace termostabilní polymerázy a optimalizace počtu cyklů PCR.

    Sem napište svoji zprávu a pošlete nám ji