Souprava DNA cirkulující sérum/plazma

A-1 Nízká koncentrace buněk nebo viru ve výchozím vzorku-Obohaťte koncentraci buněk nebo virů.

A-2 Nedostatečná lýza vzorků-vzorky nebyly důkladně promíchány s lyzačním pufrem. Doporučuje se 1–2krát důkladně promíchat pulzním vortexováním. —Nedostatečná lýza buněk způsobená poklesem aktivity proteinázy K. —Nedostatečná lýza buněk nebo degradace bílkovin v důsledku nedostatečné doby teplé lázně. Doporučuje se rozřezat tkáň na malé kousky a prodloužit dobu lázně, aby se odstranily všechny zbytky z lyzátu.

A-3 Nedostatečná adsorpce DNA. —Než byl lyzát přenesen do rotační kolony, nebyl přidán žádný ethanol nebo nízké procento místo 100% ethanolu.

A-4 Hodnota pH elučního pufru je příliš nízká. —Upravte pH mezi 8,0-8,3.

Zbytkový ethanol v eluentu.

—V eluentu je zbytkový promývací pufr PW. Ethanol lze odstranit odstředěním odstřeďovací kolony po dobu 3–5 minut a poté umístěním při pokojové teplotě nebo inkubátoru při 50 ° C na 1–2 minuty.

A-1 Vzorek není čerstvý. —Vytáhněte pozitivní vzorek DNA jako kontrolu, abyste zjistili, zda DNA ve vzorku degradovala.

A-2 Nesprávné předúpravy. —Příčinou je nadměrné mletí kapalného dusíku, opětovné získání vlhkosti nebo příliš velké množství vzorku.

Předběžné úpravy by se měly u různých vzorků lišit. U rostlinných vzorků nezapomeňte důkladně rozemlet v tekutém dusíku. U zvířecích vzorků homogenizujte nebo důkladně rozetřete v tekutém dusíku. U vzorků s těžko rozbitnými buněčnými stěnami, jako jsou bakterie G+ a kvasinky, se k rozbití buněčných stěn doporučuje použít lysozym, lytikázu nebo mechanické metody.

Sada 4992201/4992202 Plant Genomic DNA Kit využívá metodu založenou na koloně, která pro extrakci vyžaduje chloroform. Je zvláště vhodný pro různé vzorky rostlin, stejně jako pro sušinu rostlin. Hi-DNAsecure Plant Kit je také na bázi kolony, ale bez nutnosti extrakce fenol/chloroformem, díky čemuž je bezpečný a netoxický. Je vhodný pro rostliny s vysokým obsahem polysacharidů a polyfenolů. 4992709/4992710 DNAquick Plant System využívá metodu založenou na kapalině. Extrakce fenolem/chloroformem také není nutná. Proces čištění je jednoduchý a rychlý bez omezení počátečních množství vzorku, takže uživatelé mohou množství flexibilně upravit podle experimentálních požadavků. Velkou velikost fragmentů gDNA lze získat s vysokým výtěžkem.

Genomová DNA byla extrahována z různých objemů vzorků lidské plné krve soupravou TIANamp Blood DNA Kit. Výsledky jsou následující. Výsledky jsou uvedeny pouze jako referenční, skutečné výsledky extrakce závisí na podmínkách vzorků.

Extrakci DNA krevní sraženiny lze provést pomocí reagencií poskytnutých v těchto dvou soupravách pouhou změnou protokolu na konkrétní instrukci pro extrakci DNA krevní sraženiny. Měkkou kopii protokolu o extrakci DNA krevní sraženiny lze vydat na vyžádání.

Čerstvý vzorek se suspenduje v 1 ml PBS, normálním fyziologickém roztoku nebo TE pufru. Vzorek zcela homogenizujte homogenizátorem a sraženinu odeberte na dno zkumavky odstředěním. Supernatant zlikvidujte a sraženinu resuspendujte s 200 μl pufru GA. Následující čištění DNA lze provést podle pokynů.

K čištění gDNA ve vzorcích plazmy, séra a tělních tekutin se doporučuje TIANamp Micro DNA Kit. Pro čištění virové gDNA ze vzorků séra/plazmy se doporučuje TIANamp Virus DNA/RNA Kit. Pro čištění bakteriální gDNA ze vzorků séra a plazmy se doporučuje TIANamp Bacteria DNA Kit (pro pozitivní bakteriální by měl být zahrnut lysozym). Pro vzorky slin se doporučuje Hi-Swab DNA Kit a TIANamp Bacteria DNA Kit.

Pro extrakci genomu hub se doporučuje DNAsecure Plant Kit nebo DNAquick Plant System. Pro extrakci genomu kvasinek se doporučuje TIANamp Yeast DNA Kit (lytikáza by měla být připravena samostatně).