Sada RNAclean

A-1 Buněčná lýza nebo homogenizace nestačí

---- Snižte spotřebu vzorku, zvyšte množství lyzačního pufru, zvyšte homogenizaci a dobu lýzy.

A-2 Množství vzorku je příliš velké

---- Snižte množství použitého vzorku nebo zvyšte množství lyzačního pufru.

A-1 Nedostatečná lýza nebo homogenizace buněk

---- Snižte spotřebu vzorku, zvyšte množství lyzačního pufru, zvyšte homogenizaci a dobu lýzy.

A-2 Množství vzorku je příliš velké

---- Podívejte se prosím na maximální kapacitu zpracování.

A-3 RNA není ze sloupce eluována úplně

---- Po přidání vody bez RNázy ji nechte několik minut odstřeďovat.

A-4 Ethanol v eluentu

---- Po opláchnutí znovu centrifugujte a odstraňte co nejvíce promývací pufr.

A-5 Buněčné kultivační médium není zcela odstraněno

---- Při shromažďování buněk nezapomeňte kultivační médium co nejvíce odstranit.

A-6 Buňky uložené v RNAstore nejsou účinně centrifugovány

---- Hustota úložiště RNA je větší než průměrné kultivační médium pro buňky; proto by měla být zvýšena odstředivá síla. Doporučuje se centrifugovat při 3000 x g.

A-7 Nízký obsah RNA a početnost ve vzorku

---- Pomocí pozitivního vzorku určete, zda je nízký výnos způsoben vzorkem.

A-1 Materiál není čerstvý

---- Čerstvé tkáně by měly být okamžitě uloženy v tekutém dusíku nebo okamžitě vloženy do činidla RNAstore, aby byl zajištěn extrakční účinek.

A-2 Množství vzorku je příliš velké

---- Snižte množství vzorku.

A-3 RNáza kontaminovanán

---- Přestože pufr dodávaný v soupravě neobsahuje RNázu, je možné během extrakce snadno kontaminovat RNázu a mělo by se s ním zacházet opatrně.

A-4 Znečištění elektroforézou

---- Vyměňte elektroforetický pufr a ujistěte se, že spotřební materiál a zaváděcí pufr jsou bez kontaminace RNázou.

A-5 Příliš mnoho zatížení pro elektroforézu

---- Snižte množství náplně vzorku, zatížení každé jamky by nemělo překročit 2 μg.

A-1 Množství vzorku je příliš velké

---- Snižte množství vzorku.

A-2 Některé vzorky mají vysoký obsah DNA a mohou být ošetřeny DNázou.

---- Proveďte zpracování DNA bez RNázy se získaným roztokem RNA a RNA může být přímo použita pro následné experimenty po ošetření, nebo může být dále čištěna pomocí souprav na purifikaci RNA.

U sklářských výrobků pečte 4 hodiny při 150 ° C. U plastových nádob se ponoří do 0,5 M NaOH na 10 minut, poté se důkladně opláchnou vodou bez RNázy a poté sterilizují, aby se RNáza zcela odstranila. Činidla nebo roztoky použité v experimentu, zejména voda, nesmí obsahovat RNázu. Pro všechny reagenční přípravky použijte vodu bez RNázy (přidejte vodu do čisté skleněné lahve, přidejte DEPC na konečnou koncentraci 0,1% (V/V), protřepávejte přes noc a autoklávujte).