2 × mix Taq Plus PCR

Ultra čistá, vysoce účinná a věrná DNA polymeráza Taq.

DNA polymeráza Taq Plus je směsí DNA polymerázy Taq a Pfu. Má 5'-3 'exonukleázovou aktivitu a 3'-5' exonukleázovou aktivitu, s charakteristikou vysoké účinnosti amplifikace a nízké míry nesouladu. Ve srovnání s Taq DNA polymerázou má Taq Plus DNA polymeráza výhody zvýšené délky amplifikace (jednoduché šablony lze efektivně zesílit až na 20 kb a komplexní šablony mohou mít až 10 kb), dobrou věrnost atd. Ve srovnání s Pfu DNA polymerázou má výhody rychlé rychlosti zesílení a vysoké účinnosti reakce.

Kočka. Ne Velikost balení
4992791 1 ml
4992792 5*1 ml
4992793 5 × 1 ml

Detail produktu

Experimentální příklad

FAQ

Značky produktů

Definice aktivity

1 jednotka (U) Taq Plus DNA Polymerázová aktivita je definována jako množství enzymu potřebného k začlenění 10 nmol deoxynukleotidů do látek nerozpustných v kyselině při 74 ° C do 30 minut s použitím aktivované DNA spermatu lososa jako templátu/primeru.

Kontrola kvality

Čistota pomocí detekce SDS-PAGE je více než 99%; Nebyla detekována žádná aktivita exogenní nukleázy; Jednokopírovací gen v lidském genomu by mohl být účinně amplifikován; Při skladování při pokojové teplotě po dobu jednoho týdne nedochází k žádné významné změně aktivity.

Hlavní technické parametry

Taq Plus DNA polymeráza má 5'-3 'exonukleázovou aktivitu a 3'-5' exonukleázovou aktivitu. PCR produkty mohou být přímo klonovány do TA vektoru. Pokud je třeba zlepšit účinnost klonování, doporučuje se nejprve vyčistit produkty PCR a před klonováním do TA vektoru provést A-tailing.

One-tube Taq Plus PCR Mix (National High-Tech Product Certification)

■ Taq Plus PCR Mix má zlepšenou specificitu a citlivost PCR reakce a může zesílit komplexní šablony s vysokým obsahem GC, sekundární strukturou a podobně. Lze zesílit až 2 kopie cílové šablony, což zajistí přesnější experimentální výsledky.

■ Unikátní vzorec Taq Plus PCR Mix činí celý reakční systém velmi stabilním a aktivita nebude ovlivněna opakovaným zmrazováním a rozmrazováním nebo dlouhodobým skladováním při 4 ° C.

■ Stabilní a účinný předem připravený roztok směsi PCR může operaci urychlit a zjednodušit, což výrazně sníží intenzitu práce a chyby vzorkování. Součástí směsi je také vysoce výkonný zesilovač a optimalizátor PCR, který snižuje požadavky na podmínky PCR.

■ Tento výrobek má systémy obsahující barviva i bez barviv. Produkty PCR Mix obsahující barvivo lze po PCR přímo elektroforetovat, bez přidání vzorkového pufru.

Aplikace

Běžně se používá pro amplifikaci šablon s vysokou věrností a složitou strukturou, jako je vysoký obsah GC a sekundární struktura. Ve většině případů může nahradit Taq DNA polymerázu.

Všechny produkty lze přizpůsobit pro ODM/OEM. Pro detaily,klikněte prosím na přizpůsobenou službu (ODM/OEM)


  • Předchozí:
  • Další:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Experimental Example K amplifikaci 1 kb fragmentu použijte genomovou DNA jako templát.
    Po reakci PCR odeberte 5 μl pro detekci elektroforézy.
    Otázka: Žádná pásma zesílení

    Šablona A-1

    ■ Šablona obsahuje proteinové nečistoty nebo inhibitory Taq atd. —— Čistěte templát DNA, odstraňte proteinové nečistoty nebo extrahujte templátovou DNA pomocí purifikačních souprav.

    ■ Denaturace šablony není úplná —— Vhodně zvyšte denaturační teplotu a prodlužte denaturační čas.

    ■ Degradace šablony —— Připravte šablonu znovu.

    Základní nátěr A-2

    ■ Špatná kvalita primerů-Znovu syntetizujte primer.

    ■ Degradace primerů —— Alikvotujte primery s vysokou koncentrací do malého objemu pro uchování. Vyvarujte se vícenásobného zmrazení a rozmrazení nebo dlouhodobé kryokonzervované na 4 ° C.

    ■ Nesprávný design primerů (např. Nedostatečná délka primeru, dimer vytvořený mezi primery atd.) -Přepracovat primery (vyhnout se tvorbě dimeru primeru a sekundární struktury)

    A-3 Mg2+koncentrace

    ■ Mg2+ koncentrace je příliš nízká —— Správně zvyšte Mg2+ koncentrace: Optimalizujte Mg2+ koncentrace sérií reakcí od 1 mM do 3 mM s intervalem 0,5 mM pro stanovení optimálního Mg2+ koncentrace pro každý templát a primer.

    A-4 Teplota žíhání

    ■ Vysoká teplota žíhání ovlivňuje vazbu primeru a šablony. —— Snižte teplotu žíhání a optimalizujte stav s gradientem 2 ° C.

    A-5 Doba prodloužení

    ■ Krátká doba prodloužení —— Prodlužte dobu prodloužení.

    Otázka: Falešně pozitivní

    Fenomény: Negativní vzorky také ukazují pásma cílové sekvence.

    A-1 Kontaminace PCR

    ■ Křížová kontaminace cílové sekvence nebo amplifikačních produktů —— Opatrně nepipetujte vzorek obsahující cílovou sekvenci do negativního vzorku ani je nevylijte z centrifugační zkumavky. Činidla nebo zařízení by měla být autoklávována, aby se odstranily stávající nukleové kyseliny, a existence kontaminace by měla být stanovena pomocí experimentů s negativní kontrolou.

    ■ Kontaminace reagencií ——Realizujte reagencie a skladujte při nízké teplotě.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ koncentrace je příliš nízká —— Správně zvyšte Mg2+ koncentrace: Optimalizujte Mg2+ koncentrace sérií reakcí od 1 mM do 3 mM s intervalem 0,5 mM pro stanovení optimálního Mg2+ koncentrace pro každý templát a primer.

    ■ Nesprávný design primerů a cílová sekvence má homologii s necílovou sekvencí. —— Přepracovat základní nátěry.

    Otázka: Nespecifické zesílení

    Jev: Pásy amplifikace PCR jsou v rozporu s očekávanou velikostí, buď velké nebo malé, nebo se někdy vyskytují jak specifické amplifikační pásy, tak nespecifické amplifikační pásy.

    Základní nátěr A-1

    ■ Špatná specificita primeru

    —— Re-design primer.

    ■ Koncentrace primeru je příliš vysoká —— Správně zvyšte denaturační teplotu a prodlužte denaturační čas.

    A-2 Mg2+ koncentrace

    ■ Mg2+ koncentrace je příliš vysoká —— Správně snižte koncentraci Mg2+: Optimalizujte Mg2+ koncentrace sérií reakcí od 1 mM do 3 mM s intervalem 0,5 mM pro stanovení optimálního Mg2+ koncentrace pro každý templát a primer.

    A-3 Termostabilní polymeráza

    ■ Nadměrné množství enzymu —— Množství enzymu přiměřeně snižte v intervalech 0,5 U.

    A-4 Teplota žíhání

    ■ Teplota žíhání je příliš nízká —— Vhodně zvyšte teplotu žíhání nebo použijte dvoustupňovou metodu žíhání

    A-5 PCR cykly

    ■ Příliš mnoho cyklů PCR — Snižte počet cyklů PCR.

    Otázka: Nepravidelné nebo rozmazané pásy

    Základní nátěr A-1——Špatná specifičnost ——Předělejte základní nátěr, změňte polohu a délku základního nátěru, abyste zvýšili jeho specifičnost; nebo proveďte vnořenou PCR.

    A-2 DNA šablony

    ——Šablona není čistá —— Purifikujte šablonu nebo extrahujte DNA pomocí purifikačních souprav.

    A-3 Mg2+ koncentrace

    ——Mg2+ koncentrace je příliš vysoká —— Správně snižte Mg2+ koncentrace: Optimalizujte Mg2+ koncentrace sérií reakcí od 1 mM do 3 mM s intervalem 0,5 mM pro stanovení optimálního Mg2+ koncentrace pro každý templát a primer.

    A-4 dNTP

    ——Koncentrace dNTP je příliš vysoká —— Vhodně snižte koncentraci dNTP

    A-5 Teplota žíhání

    —— Příliš nízká teplota žíhání —— Vhodně zvyšte teplotu žíhání

    A-6 Cykly

    ——Příliš mnoho cyklů ——Optimalizujte počet cyklů

    Otázka: Kolik templátové DNA by mělo být přidáno do 50 μl reakčního systému PCR?
    ytry
    Otázka: Jak zesílit dlouhé fragmenty?

    Prvním krokem je výběr vhodné polymerázy. Běžná Taq polymeráza nemůže být zkontrolována kvůli nedostatku aktivity 3'-5 'exonukleázy a nesoulad výrazně sníží účinnost extenze fragmentů. Pravidelná Taq polymeráza proto nemůže účinně zesilovat cílové fragmenty větší než 5 kb. Taq polymeráza se speciální modifikací nebo jinou vysoce věrnou polymerázou by měla být zvolena tak, aby se zlepšila účinnost extenze a splnily potřeby amplifikace dlouhým fragmentem. Navíc amplifikace dlouhých fragmentů také vyžaduje odpovídající úpravu designu primerů, denaturační doby, prodlužovací doby, pH pufru atd. Obvykle mohou primery s 18-24 bp vést k lepšímu výtěžku. Aby se zabránilo poškození templátu, měla by být denaturační doba při 94 ° C snížena na 30 sekund nebo méně na cyklus a doba pro zvýšení teploty na 94 ° C před amplifikací by měla být kratší než 1 min. Účinnou amplifikaci dlouhých fragmentů lze navíc zajistit nastavením teploty extenze na přibližně 68 ° C a navržením doby prodloužení podle rychlosti 1 kb/min.

    Otázka: Jak zlepšit věrnost amplifikace PCR?

    Chybovost PCR amplifikace může být snížena použitím různých DNA polymeráz s vysokou věrností. Ze všech dosud nalezených Taq DNA polymeráz má enzym Pfu nejnižší chybovost a nejvyšší věrnost (viz přiložená tabulka). Kromě výběru enzymů mohou vědci dále snížit rychlost mutace PCR optimalizací reakčních podmínek, včetně optimalizace složení pufru, koncentrace termostabilní polymerázy a optimalizace počtu cyklů PCR.

    Sem napište svoji zprávu a pošlete nám ji