2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ

Rychlý premix PCR s vysokou účinností a vysokou odolností vůči stresu.

2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ je nově optimalizovaný a vylepšený 2 × PCR premix připravený k použití se všemi základními částmi reakce PCR kromě templátu DNA a primerů.

Kočka. Ne Velikost balení
4993001 1 ml
4993002 5x1 ml
4992912 20x5x1 ml
4992913 5 × 1 ml
4992920 20 × 5 × 1 ml
4992921 20 × 5 × 1 ml

Detail produktu

Experimentální příklad

FAQ

Značky produktů

Funkce

■ Vysoká účinnost amplifikace: fragmenty DNA různých velikostí (pod 5 kb) a zdroje lze účinně amplifikovat.
■ Vysoká citlivost: Z genomových šablon lze amplifikovat až 10 pg cílových fragmentů.
■ Vysoká odolnost vůči stresu: U šablon s vysokým obsahem nečistot, jako je například hrubě extrahovaná templátová/bakteriální kultura, lze cílový fragment snadno amplifikovat. Polymerázová aktivita nebude ovlivněna opakovaným zmrazováním a rozmrazováním.
■ Pohodlné pro aplikace: Reakční systém byl připraven snadno a rychle. Zesílený fragment obsahuje 3 'konec dA-převis, který je vhodný pro klonování TA.

Specifikace

Typ: Taq DNA polymeráza
Vzorek: Purifikovaná/hrubě extrahovaná templátová/bakteriální kultura
Šablona: > 10 str
Velikost fragmentu: <5 kb
Aplikace: PCR amplifikace fragmentů DNA, značení DNA, prodloužení primerů, stanovení sekvence, detekce genů ve velkém měřítku, semikvantitativní experimenty PCR, detekce stopové DNA atd.

Všechny produkty lze přizpůsobit pro ODM/OEM. Pro detaily,klikněte prosím na přizpůsobenou službu (ODM/OEM)


  • Předchozí:
  • Další:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Obrázek 1. Šablony z různých zdrojů byly amplifikovány pomocí TIANGEN Taq MasterMix II a běžného Taq Mix od dodavatele TR, aby se detekovala odolnost činidel vůči stresu. Výsledky ukazují, že produkty TIANGEN mohou amplifikovat cílové fragmenty ze surových genomových šablon a bakteriální kultury a odolnost vůči stresu je lepší než u dodavatele TR. A: Surový genomový templát extrahovaný soupravou TIANGEN TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit. Prp/DN: Surová extrakce a detekce vzorků lidské krve. Rýže: Surová extrakce a detekce vzorků rýže. B: PCR kolonie. Fragment PCR má 700 bp.
    M: TIANGEN Marker III
     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Dobrá univerzálnost pro šablony z různých zdrojů as různými délkami
    Obrázek 2. Fragmenty různých zdrojů a délek byly amplifikovány pomocí TIANGEN Taq MasterMix II (A) a obyčejný Taq Mix dodavatele TK (B), dodavatele TR (C), dodavatele V (D) a dodavatele G (E). Výsledky ukazují, že komplexní výkonnost produktů TIANGEN je nejlepší, pokud jde o schopnost zesílení, specifičnost a univerzálnost. M: TIANGEN Marker III1: Šablona genomové DNA sóji (120 bp);

    2-3: Rýžový genomový DNA templát (694 bp, 2258 bp);

    4: Bavlněný genomový DNA templát (200 bp);

    5: Escherichia coli templát genomové DNA (2298 bp);

    6-7: Šablona DNA genomu myši (1 kb, 2 kb);

    8-10: Krysí genomová DNA templát (1 kb, 2 kb, 2080 bp);

    11-18: Šablona DNA lidského genomu (300 bp, 448 bp (GC%: 74,8%), 1100 bp, 750 bp,

    1000 bp, 1090 bp (GC%: 70,4%), 2 kb, 4 kb)

     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Vysoká citlivost
    Obrázek 3. Různé koncentrace krysích a lidských fragmentů DNA byly amplifikovány pomocí TIANGEN Taq MasterMix II (A), obyčejný Taq Mix dodavatele V (B) a dodavatele TK (C) pro detekci citlivosti zesílení. Výsledky ukazují, že produkt TIANGEN by mohl amplifikovat cílový fragment z genomového templátu až na 0,01 ng a jeho citlivost je lepší než u produktů od dodavatele V a TK.M: TIANGEN Marker III, N: NTCT vstup šablony 1-8 : 200 ng, 100 ng, 50 ng, 20 ng, 10 ng, 1 ng, 0,1 ng, 0,01 ng.
    Otázka: Žádná pásma zesílení

    Šablona A-1

    ■ Šablona obsahuje proteinové nečistoty nebo inhibitory Taq atd. —— Čistěte templát DNA, odstraňte proteinové nečistoty nebo extrahujte templátovou DNA pomocí purifikačních souprav.

    ■ Denaturace šablony není úplná —— Vhodně zvyšte denaturační teplotu a prodlužte denaturační čas.

    ■ Degradace šablony —— Připravte šablonu znovu.

    Základní nátěr A-2

    ■ Špatná kvalita primerů-Znovu syntetizujte primer.

    ■ Degradace primerů —— Alikvotujte primery s vysokou koncentrací do malého objemu pro uchování. Vyvarujte se vícenásobného zmrazení a rozmrazení nebo dlouhodobé kryokonzervované na 4 ° C.

    ■ Nesprávný design primerů (např. Nedostatečná délka primeru, dimer vytvořený mezi primery atd.) -Přepracovat primery (vyhnout se tvorbě dimeru primeru a sekundární struktury)

    A-3 Mg2+koncentrace

    ■ Mg2+ koncentrace je příliš nízká —— Správně zvyšte Mg2+ koncentrace: Optimalizujte Mg2+ koncentrace sérií reakcí od 1 mM do 3 mM s intervalem 0,5 mM pro stanovení optimálního Mg2+ koncentrace pro každý templát a primer.

    A-4 Teplota žíhání

    ■ Vysoká teplota žíhání ovlivňuje vazbu primeru a šablony. —— Snižte teplotu žíhání a optimalizujte stav s gradientem 2 ° C.

    A-5 Doba prodloužení

    ■ Krátká doba prodloužení —— Prodlužte dobu prodloužení.

    Otázka: Falešně pozitivní

    Fenomény: Negativní vzorky také ukazují pásma cílové sekvence.

    A-1 Kontaminace PCR

    ■ Křížová kontaminace cílové sekvence nebo amplifikačních produktů —— Opatrně nepipetujte vzorek obsahující cílovou sekvenci do negativního vzorku ani je nevylijte z centrifugační zkumavky. Činidla nebo zařízení by měla být autoklávována, aby se odstranily stávající nukleové kyseliny, a existence kontaminace by měla být stanovena pomocí experimentů s negativní kontrolou.

    ■ Kontaminace reagencií ——Realizujte reagencie a skladujte při nízké teplotě.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ koncentrace je příliš nízká —— Správně zvyšte Mg2+ koncentrace: Optimalizujte Mg2+ koncentrace sérií reakcí od 1 mM do 3 mM s intervalem 0,5 mM pro stanovení optimálního Mg2+ koncentrace pro každý templát a primer.

    ■ Nesprávný design primerů a cílová sekvence má homologii s necílovou sekvencí. —— Přepracovat základní nátěry.

    Otázka: Nespecifické zesílení

    Jev: Pásy amplifikace PCR jsou v rozporu s očekávanou velikostí, buď velké nebo malé, nebo se někdy vyskytují jak specifické amplifikační pásy, tak nespecifické amplifikační pásy.

    Základní nátěr A-1

    ■ Špatná specificita primeru

    —— Re-design primer.

    ■ Koncentrace primeru je příliš vysoká —— Správně zvyšte denaturační teplotu a prodlužte denaturační čas.

    A-2 Mg2+ koncentrace

    ■ Mg2+ koncentrace je příliš vysoká —— Správně snižte koncentraci Mg2+: Optimalizujte Mg2+ koncentrace sérií reakcí od 1 mM do 3 mM s intervalem 0,5 mM pro stanovení optimálního Mg2+ koncentrace pro každý templát a primer.

    A-3 Termostabilní polymeráza

    ■ Nadměrné množství enzymu —— Množství enzymu přiměřeně snižte v intervalech 0,5 U.

    A-4 Teplota žíhání

    ■ Teplota žíhání je příliš nízká —— Vhodně zvyšte teplotu žíhání nebo použijte dvoustupňovou metodu žíhání

    A-5 PCR cykly

    ■ Příliš mnoho cyklů PCR — Snižte počet cyklů PCR.

    Otázka: Nepravidelné nebo rozmazané pásy

    Základní nátěr A-1——Špatná specifičnost ——Předělejte základní nátěr, změňte polohu a délku základního nátěru, abyste zvýšili jeho specifičnost; nebo proveďte vnořenou PCR.

    A-2 DNA šablony

    ——Šablona není čistá —— Purifikujte šablonu nebo extrahujte DNA pomocí purifikačních souprav.

    A-3 Mg2+ koncentrace

    ——Mg2+ koncentrace je příliš vysoká —— Správně snižte Mg2+ koncentrace: Optimalizujte Mg2+ koncentrace sérií reakcí od 1 mM do 3 mM s intervalem 0,5 mM pro stanovení optimálního Mg2+ koncentrace pro každý templát a primer.

    A-4 dNTP

    ——Koncentrace dNTP je příliš vysoká —— Vhodně snižte koncentraci dNTP

    A-5 Teplota žíhání

    —— Příliš nízká teplota žíhání —— Vhodně zvyšte teplotu žíhání

    A-6 Cykly

    ——Příliš mnoho cyklů ——Optimalizujte počet cyklů

    Otázka: Kolik templátové DNA by mělo být přidáno do 50 μl reakčního systému PCR?
    ytry
    Otázka: Jak zesílit dlouhé fragmenty?

    Prvním krokem je výběr vhodné polymerázy. Běžná Taq polymeráza nemůže být zkontrolována kvůli nedostatku aktivity 3'-5 'exonukleázy a nesoulad výrazně sníží účinnost extenze fragmentů. Pravidelná Taq polymeráza proto nemůže účinně zesilovat cílové fragmenty větší než 5 kb. Taq polymeráza se speciální modifikací nebo jinou vysoce věrnou polymerázou by měla být zvolena tak, aby se zlepšila účinnost extenze a splnily potřeby amplifikace dlouhým fragmentem. Navíc amplifikace dlouhých fragmentů také vyžaduje odpovídající úpravu designu primerů, denaturační doby, prodlužovací doby, pH pufru atd. Obvykle mohou primery s 18-24 bp vést k lepšímu výtěžku. Aby se zabránilo poškození templátu, měla by být denaturační doba při 94 ° C snížena na 30 sekund nebo méně na cyklus a doba pro zvýšení teploty na 94 ° C před amplifikací by měla být kratší než 1 min. Účinnou amplifikaci dlouhých fragmentů lze navíc zajistit nastavením teploty extenze na přibližně 68 ° C a navržením doby prodloužení podle rychlosti 1 kb/min.

    Otázka: Jak zlepšit věrnost amplifikace PCR?

    Chybovost PCR amplifikace může být snížena použitím různých DNA polymeráz s vysokou věrností. Ze všech dosud nalezených Taq DNA polymeráz má enzym Pfu nejnižší chybovost a nejvyšší věrnost (viz přiložená tabulka). Kromě výběru enzymů mohou vědci dále snížit rychlost mutace PCR optimalizací reakčních podmínek, včetně optimalizace složení pufru, koncentrace termostabilní polymerázy a optimalizace počtu cyklů PCR.

    Sem napište svoji zprávu a pošlete nám ji